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無菌均質(zhì)器獲取單個(gè)組織細(xì)胞的解決方案

發(fā)布時(shí)間:2019-09-20 12:12:14點(diǎn)擊量:

無菌均質(zhì)器獲取單個(gè)組織細(xì)胞的方法:


將手術(shù)中切取的腫瘤組織(如胃癌、大腸癌、乳腺癌等)放在無菌培養(yǎng)皿中,用含有慶大霉素100U/ML的生理鹽水洗滌,去除組織上黏附的細(xì)菌,清洗三遍后按2g重量10ml生理鹽水的比例,用消毒過的剪刀將組織剪成小塊,組織剪成2-5mm見方盡可能剪小,一起裝入汗諾無菌均質(zhì)袋中。

選用均質(zhì)器汗諾HN-08HN-12N型拍打式均質(zhì)器,設(shè)置拍擊次數(shù)7/秒,工作時(shí)間5-10分鐘,每分鐘停1分鐘,計(jì)算累計(jì)工作時(shí)間,不同組織的工作時(shí)間稍有不同。

再將經(jīng)均質(zhì)器處理后組織混合物吸入試管中,靜置3-5分鐘,取澄清的部分組織細(xì)胞懸濁液,內(nèi)含有大量單個(gè)分散細(xì)胞,用小型離心機(jī)1000轉(zhuǎn)/分鐘 離心5分鐘,加入含20%小牛血清培養(yǎng)液,可以直接培養(yǎng),細(xì)胞數(shù)可以調(diào)節(jié)在2*10? ml左右,總細(xì)胞數(shù)隨組織大小可以有變化,但培養(yǎng)用細(xì)胞足夠多。

觀察到單個(gè)圓形細(xì)胞為所需要的被分散的單細(xì)胞,包括腺體細(xì)胞以及上皮類細(xì)胞,不規(guī)則梭形細(xì)胞為打散的肌纖維細(xì)胞,也是分散的單細(xì)胞。都有完整圓潤的細(xì)胞形態(tài),活性好。